Autores desenvolvem NIPT simples, rápido e sensível para identificação de mutações β+IVSI-110 e β039 herdadas da mãe, aplicáveis a partir da 7ª semana de gestação
Avanços na tecnologia de PCR (reação em cadeia da polimerase) têm permitido diagnósticos mais rápidos, precisos e muito menos invasivos. Tanto que, hoje é possível detectar quantidades ínfimas de DNA livre de células (cfDNA) em plasma e outros fluídos, abrindo portas para testes diagnósticos por biópsia líquida. Com isso, testes pré-natais são possíveis sem interferência na gestação ou no organismo do feto e mãe. Incluíndo testes genéticos de sexagem ou de mutações, auxiliando o diagnóstico de condições genéticas como na síndrome de Edwards, Síndrome de Turner etc.
O teste pré-natal não invasivo (NIPT) é baseado na detecção e caracterização do DNA livre fetal de células circulantes (ccffDNA) no plasma materno, usando uma simples amostra de sangue periférico materno, evitando riscos associados a procedimentos invasivos convencionais.
Atualmente, os kits comerciais de NIPT podem apenas detectar aneuploidias, pequenas deleções, inserções e algumas mutações pontuais de um único gene, herdadas do pai que causam doenças genéticas, mas não as herdadas da mãe. Pensando nisso, D’Aversa e colaboradores desenvolveram dois ensaios NIPT, baseados na inovadora e sensível tecnologia de ddPCR (reação em cadeia da polimerase digital em gotas), para identificar as duas mutações de β talassemia mais comuns na área do Mediterrâneo (β+IVSI-110 e β039), materna e /ou herdada do pai, por genotipagem fetal.
Os ensaios foram otimizados em termos de eficiência de amplificação e especificidade, usando mistura de dois DNAs genômicos com diferentes genótipos e porcentagens, para simular DNA livre de células circulantes fetal e materno (ccfDNA) em várias semanas gestacionais.
Os dois ensaios de ddPCR foram aplicados para determinar o genótipo fetal de 52 amostras de plasma materno em diferentes idades gestacionais e os resultados diagnósticos foram confirmados para todas as amostras por sequenciamento de DNA.
No artigo, foi demonstrado que a tecnologia ddPCR pode ser usada para o NIPT de mutações β+IVSI-110 e β039, herdadas de mãe e pai. Esses dados confirmam que a ddPCR é uma tecnologia robusta, sensível, eficiente e confiável para detectar facilmente mutações de ponto único. Além disso, concluiu-se que a ddPCR é adequada para aplicação em idades gestacionais muito precoces, como a sétima semana de gestação.
Referência:
D’Aversa, E.; Breveglieri, G.; Boutou, E.; Balassopoulou, A.; Voskaridou, E.; Pellegatti, P.; Guerra, G.; Scapoli, C.; Gambari, R.; Borgatti, M. Droplet Digital PCR for NonInvasive Prenatal Detection of Fetal Single-Gene Point Mutations in Maternal Plasma. Int. J. Mol. Sci. 2022, 23, 2819. https://doi.org/ 10.3390/ijms23052819
Leituras adicionais:
- D’Aversa, E.; Breveglieri, G.; Boutou, E.; Balassopoulou, A.; Voskaridou, E.; Pellegatti, P.; Guerra, G.; Scapoli, C.; Gambari, R.; Borgatti, M. Droplet Digital PCR for Non-Invasive Prenatal Detection of Fetal Single-Gene Point Mutations in Maternal Plasma. Int. J. Mol. Sci. 2022, 23, 2819. https://doi.org/10.3390/ijms23052819
- Richard C Caswell, Tristan Snowsill, Jayne A L Houghton, Ali J Chakera, Maggie H Shepherd, Thomas W Laver, Bridget A Knight, David Wright, Andrew T Hattersley, Sian Ellard, Noninvasive Fetal Genotyping by Droplet Digital PCR to Identify Maternally Inherited Monogenic Diabetes Variants, Clinical Chemistry, Volume 66, Issue 7, July 2020, Pages 958–965, https://doi.org/10.1093/clinchem/hvaa104
- Taylor, S.C., Laperriere, G. & Germain, H. Droplet Digital PCR versus qPCR for gene expression analysis with low abundant targets: from variable nonsense to publication quality data. Sci Rep 7, 2409 (2017). https://doi.org/10.1038/s41598-017-02217-x
- “What is Droplet Digital PCR?”. Droplet Digital PCR (ddPCR) Technology | Bio-Rad Laboratories
