Você já teve um anticorpo impactando negativamente seus experimentos? Se a resposta foi sim, você não está sozinho.
A ciência está repleta de pesquisadores que viram estudos promissores desandarem por causa de um anticorpo inadequado (Baker M, 2015). Um exemplo é quando os resultados não podem ser reproduzidos com um novo lote, ou quando um pesquisador descobre que o anticorpo não se liga à proteína alvo.
Esses equívocos levam à perda de tempo e de recursos financeiros, mas pode acontecer com qualquer um. Por isso, algumas premissas básicas podem ajudar na escolha do anticorpo mais adequado ao seu experimento, garantindo que você atinja o desempenho esperado nas suas pesquisas.
1. Compre o anticorpo validado para sua aplicação
Os anticorpos são uma ferramenta incrivelmente versátil para os cientistas, mas têm as suas limitações. Alguns não são eficazes na ligação de proteínas desnaturadas, o que os torna uma má escolha para Western Blot. O produto que você compra deve ter sido testado especificamente para western blotting, com dados para comprovar isso. Tenha cuidado se houver apenas alguns artigos revisados por pares, pois é comum mostrar apenas a faixa de interesse e não deixar claro quais outras faixas inespecíficas podem estar lá.
2. Observe todos os dados disponíveis, começando com os fornecidos pelo fabricante
Verifique se os anticorpos citados em artigos publicados corroboram com as aplicações e instruções fornecidas no site do fabricante. Pesquisadores que compram produtos com base em dados incompletos correm o risco de confirmar descobertas incorretas na literatura científica.
3. Esteja ciente de que nem todas as validações são iguais
Buscar fornecedores que sejam transparentes em seus estudos também lhe dará uma ideia da qualidade da validação dos anticorpos.
Para economizar tempo e custos, os fabricantes podem não testar todos os lotes, liberando-os com uma variabilidade considerável. Outro aspecto é a utilização de proteínas superexpressas em seus estudos, como um atalho para evidenciar que o anticorpo se liga ao alvo de interesse.
Em casos como esses, os dados resultantes não são uma boa indicação de como o anticorpo funcionará num western blot de média complexidade, menos ainda com amostras desafiadores.
Por isso, dê preferência a fornecedores que validam seus anticorpos com lisados de células inteiras ou que usam uma variedade de amostras, testando cada lote que é produzido.
4. Use referências de outros estudos e bancos de dados
Para acelerar o processo de referência, muitas organizações foram criadas para reunir de forma independente dados sobre o desempenho dos anticorpos.
Alguns, como o CiteAb, fornecem um banco de dados de citações de anticorpos em publicações revisadas por pares. Outros grupos realizam seus próprios testes e disponibilizam esses dados. Embora reúnam muitas informações, muitas vezes elas vêm de um único tipo de fonte, na maioria das vezes secundária. Portanto, é importante verificar se as informações são consistentes com os dados primários do site do fornecedor.
5. Considere a disponibilidade de amostras
Muitos fabricantes agora oferecem pequenas quantidades de anticorpos para permitir que você teste o produto antes de fazer um pedido grande. Esta é uma boa maneira de confirmar se o anticorpo funcionará para você sem grande investimento financeiro.
6. Esteja preparado para otimizar até mesmo um anticorpo validado
A validação do fornecedor pode não substituir completamente os testes internos. Sua amostra pode não ser a mesma e seu protocolo pode ser diferente. A combinação dessas e de outras variáveis afetará o desempenho do anticorpo e diferenciará seu western blot da validação do fabricante. Você é o guardião da confiabilidade em seu estudo, por isso, faça sua própria validação interna conforme necessário.
7. Por fim…
Esteja você procurando, usando ou revisando trabalhos com anticorpos, a coisa mais importante é estar atento as diferentes técnicas e as variações associadas a elas. Seja rigoroso ao fazer seu screening de anticorpos. Use controles positivos e negativos, quando possível, e administre seus próprios vieses para garantir que seus western blots forneçam as respostas corretas às suas perguntas.
A Bio-Rad tem o compromisso de fornecer a seus clientes ferramentas de pesquisa confiáveis e aprimora constantemente os padrões de qualidade de anticorpos. A linha PrecisionAb Antibody, rigorosamente testada para western blotting quanto à especificidade e reprodutibilidade, foi projetada para ajudar os pesquisadores a produzir dados de western blotting da mais alta qualidade. Para maiores informações, acesse nosso site.
Referências
Baker M (2003). Reproducibility crisis: Blame it on the antibodies. Nature 521.
Adaptado de Bio-Radiations – Matéria original disponível em: https://www.bioradiations.com/7-tips-for-choosing-the-right-antibody-for-western-blotting/
