Você já pensou como sua placa de PCR pode afetar seus resultados? As placas normalmente não recebem tanta atenção durante o delineamento dos experimentos, mas são cruciais para o sucesso das análises, assim como os reagentes e equipamentos que você escolhe. Antes de definir seu próximo experimento de PCR, faça essas 5 perguntas a si mesmo:
1. Qual altura a placa deve ter?
Você já retirou sua placa do termociclador e percebeu poços vazios, gotículas no selo ou nas tampas ou poços quebrados? Esses são problemas que podem acontecer se você utilizar uma placa com altura inadequada para seu termociclador. As placas para PCR podem ser high-profile (20.7 mm altura) ou low-profile (15.5mm). Conhecer as configurações do seu instrumento e o mecanismo da tampa te ajudará a escolher placa apropriada.
A tampa do termociclador ou equipamento de PCR em Tempo Real contém um conjunto de placas aquecidas que ficam sob a placa de PCR quando ela é fechada, aplicando uma pressão sobre o selo ou tampas. Usar uma placa que é muito alta para o equipamento causará muita pressão aplicada sobre ela, comprimindo os poços durante a termociclagem. Em contrapartida, usar uma placa low-profile em um instrumento projetado para placas high-profile resultará em uma pressão insuficiente sendo aplicada, o que implica em condensação ou evaporação da amostra.
Instrumentos com tampas ajustáveis são compatíveis com placas low e high profile. Uma característica comum identificada desses equipamentos é uma roda que você pode girar para apertar ou soltar a tampa.
Alguns equipamentos detectam e se ajustam automaticamente para diferentes alturas de placas. Tais instrumentos oferecem flexibilidade para selecionar a melhor placa para sua aplicação. Como alternativa, instrumentos com tampa de altura fixa podem ser usados apenas com a placa de tamanho apropriado. Identificar as especificações do seu equipamento e placa te ajudarão a atenuar problemas com o método de selagem e evitar fissuras nos poços.
A Bio-Rad oferece uma grande variedade de placas que incluem os modelos high e low-profile, de acordo com as necessidades do seu equipamento. Acesse nosso Guia Seletor em bio-rad.com/PCRPlasticSelector para escolher a altura ideal de placa para seu equipamento.
2. Sua placa precisa de borda (“Skirt”)?
Numa placa de PCR, “skirt” é uma borda externa que estrutura a placa, conferindo rigidez e uma superfície plana para manipulação através de robôs e automações. As placas de PCR possuem 3 tipos diferentes de bordas: unskirted, semi-skirted ou full-skirted.
A estrutura da placa unskirted termina na borda da placa e não tem uma superfície vertical. Placas semi-skirted tem uma superfície vertical que estende até a metade da altura do poço. E a full-skirted apresenta uma superfície vertical que estende pela altura completa do poço.
O comprimento correto da borda depende do seu termociclador. Em alguns equipamentos, o bloco térmico termina no deck e não há espaço para uma placa com borda. Outros posicionam o bloco térmico de forma que aceitam as placas semi e full-skirted. No caso de utilizar automação, a placa de PCR deve ser semi ou full-skirted, para oferecer uma superfície de encaixe para o robô.
As placas Hard-Shell™ da Bio-Rad compreende opções semi e full-skirted com estrutura rígida, desenvolvida para uso com plataformas automatizadas. Na brochura disponível no site, você pode acessar mais informações desse modelo de placa de PCR.
3. De quais cores os poços da placa podem ser?
Você sabia que a cor dos poços da sua placa de PCR pode afetar no resultado da reação? Há várias cores de poços para placas e as mais comuns são branco e transparente. Cada uma apresenta vantagens e desvantagens distintas que devem ser consideradas ao escolher a opção mais apropriada para seu experimento.
Poços transparentes são feitos de polipropileno sem nenhuma adição de cor, por isso são translúcidos. Uma vantagem dessa opção é que ela permite o usuário visualizar e monitorar a pipetagem, uma vez que o volume da amostra pode ser visto do fundo, das laterais ou do topo da placa. Poços transparentes também permitem visualizar se você esqueceu de pipetar em um poço ou se os volumes diferem de um para outro. A principal desvantagem de usar poços transparentes é a possibilidade de “vazar” fluorescência. Quando o sinal da fluorescência de um poço “vaza” para um poço adjacente, o resultado dos poços vizinhos será artificialmente mais alto. Essa situação é especialmente preocupante quando uma amostra com alto sinal de fluorescência está muito próxima a outra amostra com baixa concentração do alvo, uma vez que o vazamento de fluorescência irá equivocadamente elevar o sinal proveniente do poço com baixa concentração.
Poços brancos são feitos de polipropileno com adição de corante branco na resina, resultando em poços opacos. Ver quais poços contém amostras e seus volumes é mais desafiador quando o poço é branco, porque você só pode ver a amostra olhando de cima (adicionar um corante inerte a amostra ajuda a minimizar esse ponto). Esse modelo de placas oferece uma vantagem significativa: eles previnem o escape de luz de um poço para outro, aumentando a razão de sinal-ruído. A melhora dessa taxa é crítica quando se está amplificando e detectando um sinal proveniente de amostras com baixa concentração.
As placas Hard-Shell estão disponíveis em poços brancos e transparentes e você pode selecionar o modelo mais adequado ao seu equipamento e aplicação com o Guia Seletor de Plásticos, em bio-rad.com/PCRPlasticSelector .
4. Sua placa precisa de uma estrutura rígida?
Você já segurou uma placa de PCR por uma borda e notou que ela está levemente flácida? Placas de PCR que torcem e dobram facilmente são difíceis de manusear – e podem prejudicar a eficiência de sua reação de PCR.
Se uma placa de PCR não ficar plana no termociclador, os poços podem não fazer um contato consistente com o bloco resultando em um aquecimento desigual das amostras. Além disso, uma placa que não se encaixa adequadamente ao equipamento pode torcer ou deformar à medida que sofre aquecimento e resfriamento, fazendo com que as tampas ou selos sejam desencaixados, resultando na evaporação da amostra. E, claro, uma placa de PCR que pode facilmente ser contorcida não é compatível com uma automação, que exige que as placas tenham uma conformação estável para que as pinças funcionem. Então, o que há em uma placa de PCR que a torna rígida?
Placas de PCR são produzidas a partir de um ou dois componentes. Placas de um componente são feitas inteiramente de resina de polipropileno e fabricadas utilizando um único molde. A resina de polipropileno é ideal para placas de PCR, pois permite a moldagem de poços de paredes finas e favorece a transferência térmica durante os ciclos.
Contudo, fazer a estrutura da placa e seus poços com esse material tem suas limitações. O polipropileno se mantém maleável e pode sofrer mudanças de conformação quando submetido a variações de temperaturas nos ciclos de PCR. Um encolhimento desigual da estrutura de polipropileno fará com que a placa se torça e isso pode fazer com que a vedação se solte. Quando isso acontece, a amostra evaporará, gerando problemas nos resultados.
Por outro lado, placas de PCR produzidas com 2 componentes apresentam uma estrutura de policarbonato e poços de polipropileno. A estrutura é produzida primeiro, depois os poços são moldados na parte interna das bordas. A vantagem de usar policarbonato é que a estrutura pode suportar melhor as mudanças de temperatura, resultando em uma placa de PCR rígida e menos propensa a torção. Como as placas de PCR construídas com um design de dois componentes são rígidas, a vedação permanece aderida à placa e as amostras têm menos probabilidade de evaporar. Isso torna a placa de dois componentes uma escolha muito melhor para ensaios de PCR.
Se você usa automação para aprimorar a eficiência, acuracidade e throughput dos seus testes, a placa ideal é a de 2 componentes, considerando que a estrutura rígida oferece uma superfície estável para o robô pegar e segurar, contribuindo para movimentos precisos e alinhamento correto da placa no termociclador.
As placas modelos Hard-Shell são feitas de 2 componentes e oferecem uma estrutura rígida e robusta produzidas com uma resina proprietária de policarbonato, combinada com poços de polipropileno. Utilizar placas Hard-Shell garante que suas dimensões se manterão estáveis durante a ciclagem, que as amostras permanecerão devidamente seladas e que automações robóticas poderão facilmente pegar a placa para transportá-la antes e depois da termociclagem.
5. Você pode confiar no seu fornecedor de placas de PCR?
Você espera uma performance consistente da sua placa de PCR, sem alterações de placa para placa e de lote para lote. Padrões de controle de qualidade rigorosos são essenciais para uma fabricação estável desses produtos.
A Bio-Rad garante que seus produtos são da melhor qualidade antes de chegarem ao seu laboratório, exigindo testes minuciosos durante todo o processo de fabricação. As placas Hard-Shell são produzidas em nosso Manufacturing Centers of Excellence com certificação ISO 13485, utilizando moldagem por injeção de precisão.
Todos os aspectos relacionados aos processos de produção são monitorados para assegurar produtos da mais alta qualidade, desde a testagem de matéria-prima até inspeções de produto em processamento e acabado. Nós inspecionamos nossas placas de PCR durante a fabricação para garantir que tenham uma dimensão consistente, tenham baixa fluorescência de fundo e estejam livres de defeitos. Além disso, fornecemos um Certificado de Análise (CoA) para cada lote de placas, indicando que está livre de DNAse, RNAse e DNA humano.
Escolha sua placa de PCR
No momento de decidir onde comprar sua placa de PCR, pergunte a si mesmo: Qual a altura e tipo de borda são compatíveis com meu termociclador? Qual é a cor do poço mais adequada para meu experimento? Vou precisar de uma placa rígida, que se encaixe corretamente ao equipamento e a automação? Eu confio nos critérios de qualidade adotados pelo fornecedor? Uma vez que você tenha determinado suas necessidades, você está pronto para pedir seu produto.
Viste nossa página para consumíveis de PCR para saber mais sobre as opções de placas.
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